實(shí)驗(yàn)干貨—ELISA實(shí)驗(yàn)顯性淡、靈敏度低是為什么?怎么解決?

　　Elisa 實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。

　　酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

　　一、顯色淡，靈敏度偏低

　　可能原因及解決方法：

　　試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平試劑盒未充分平衡衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品

　　2、樣品不適合做ELISA檢測(cè)形式可能不適合做ELISA檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)的條件(例如稀釋液的成分)

　　3、酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過分防止板過于干燥，干燥

　　4、包被抗體遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底

　　5、樣本和抗體孵育條件不合適，按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育

　　6、洗滌浸泡時(shí)間過長，按照說明書操作，勿人為增加漫泡時(shí)間

　　7、偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑，重新配置

　　8、錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑，重新配置確定合適的孵育時(shí)間:人為判定-最高濃度的標(biāo)準(zhǔn)TMB底物孵育時(shí)間過短，因非人。

　　9、品出現(xiàn)深藍(lán)色;S4-5有淡藍(lán)色;機(jī)器判定620n為因素影響，需要優(yōu)化孵育時(shí)間m波長下測(cè)定OD值達(dá)到0.6-0.65

　　10、樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng)建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本最佳稀釋倍數(shù)酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問題或者波

　　11、確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測(cè)長選擇不對(duì)不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA專用高吸

　　12、酶標(biāo)板不適合做ELISA附力板子

　　二、出現(xiàn)白板，陽性對(duì)照不顯色

　　可能原因及解決方法：

　　1、顯色液變質(zhì)更換新的顯色液

　　2、洗滌液配制有誤請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制

　　3、未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加

　　4、終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓?yīng)看清標(biāo)簽請(qǐng)按照說明書所示配置說明書，注意

　　5、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法錯(cuò)誤/或標(biāo)準(zhǔn)品有問題單位和稀釋倍數(shù)，建議使用同批次試劑盒，不能混用不

　　6、不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑混用，同試劑盒或不同批號(hào)的試劑

　　三、不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　可能原因及解決方法：

　　1、錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

　　2、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤按照說明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

　　3、標(biāo)準(zhǔn)品污染用一次性的滅菌吸頭，標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8℃

　　4、錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟按照說明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，

　　5、波長選擇錯(cuò)誤而前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長

　　6、標(biāo)準(zhǔn)品混用不同批號(hào)試劑勿混用

　　7、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫長，溫度太高，標(biāo)準(zhǔn)品失ELISA未終止而直接檢測(cè)4顯色需終止后檢測(cè)，否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀

　　8、50nm和620nm數(shù)高的現(xiàn)象。

　　四、OD值超出正常范圍

　　可能原因及解決方法：

　　1、錯(cuò)誤的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋按照說明書稀釋

　　2、偶聯(lián)抗體濃度過高按照說明書調(diào)整到最佳的濃度

　　3、TMB底物孵育時(shí)間過長調(diào)整到合適的孵育時(shí)間

　　4、樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染避免污染

　　5、錯(cuò)誤的孵育時(shí)間或溫度按照說明書

　　6、孵育時(shí)未加蓋導(dǎo)致溶液揮發(fā)和污染 貼封片或加蓋

　　elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。