ELISA試劑盒常見問題解析

　　1. 標準曲線線性不佳?

　　可能原因?：

　　標準品溶解不充分或稀釋錯誤(建議使用新鮮配置的母液)。

　　孵育時間/溫度不穩定(需嚴格控制在37℃±1℃)。

　　洗板不jing(建議使用洗板機，確保每孔注滿洗滌液)。

　　解決方案?：

　　標準品分裝后-20℃保存，避免反復凍融。

　　使用前充分震蕩混勻，梯度稀釋時更換槍頭。

　　2. 顯色異常(顏色過淺或過深)?

　　可能原因?：

　　底物溶液失效(TMB避光保存，開封后1個月內用完)。

　　終止液添加時間不一致(建議顯色后5分鐘內終止)。

　　樣本濃度過高(需預實驗確定稀釋倍數)。

　　解決方案?：

　　檢查底物是否出現藍色沉淀(變質標志)。

　　使用酶標儀讀取OD值，避免肉眼判斷誤差。

　　3. 重復性差(板內/板間變異大)?

　　可能原因?：

　　加樣量不準(建議使用校準后的移液器，避免氣泡)。

　　孔間污染(加樣時槍頭勿觸碰孔壁)。

　　孵育環境不均(使用恒溫搖床或水浴)。

　　解決方案?：

　　設置復孔(至少3孔/樣本)，CV值應<15%。

　　4. 高背景值?

　　可能原因?：

　　封閉不充分(建議使用5%脫脂奶粉或BSA封閉)。

　　一抗/二抗濃度過高(需優化抗體稀釋比例)。

　　洗滌液殘留(洗板后拍干，避免交叉污染)。

　　解決方案?：

　　增加封閉時間(37℃ 1小時或4℃過夜)。

　　5. 樣本OD值超出標準曲線范圍?

　　可能原因?：

　　樣本基質干擾(如高脂、溶血樣本需預處理)。

　　樣本稀釋倍數不足(建議預實驗確定線性范圍)。

　　解決方案?：

　　使用樣本稀釋液(含1% BSA或0.1%吐溫-20)。

　　6. 酶標儀讀數異常?

　　可能原因?：

　　濾光片選擇錯誤(TMB檢測需450nm，OD校正570nm)。

　　孔底氣泡或污染(讀數前輕震板)。

　　解決方案?：

　　定期校準酶標儀，使用空白孔調零。

　　操作注意事項?

　　試劑平衡?：所有試劑使用前需室溫平衡30分鐘。

　　時間控制?：顯色反應時間嚴格按說明書(通常10-15分鐘)。

　　數據記錄?：及時記錄OD值，避免終止液揮發后讀數。

　　若問題持續，建議聯系供應商提供技術復核(如抗體效期驗證或樣本檢測)。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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