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　　大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)通常包含以下內(nèi)容，但請(qǐng)注意，具體說(shuō)明可能因不同制造商和試劑盒版本而有所差異。以下是一個(gè)基于通用標(biāo)準(zhǔn)的概述：

　　BS-8543   大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　?用途?：本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的含量，僅供研究使用。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)水平。用純化的大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被的微孔中依次加入大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)含量。

　　三、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含酶標(biāo)包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)試劑、樣品稀釋液、顯色劑A液、顯色劑B液、終止液、濃縮洗滌液等組件，具體數(shù)量和配置可能因試劑盒規(guī)格(如48孔或96孔)而異。

　　四、樣本采集與處理

　　?血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。

　　?血漿?：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。

　　?尿液?：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　?細(xì)胞培養(yǎng)上清?：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

　　?組織標(biāo)本?：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS(PH7.4)。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

　　標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟

　　?標(biāo)準(zhǔn)品的加樣?：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。

　　?加樣?：在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液，然后再加待測(cè)樣品。加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　?加酶?：每孔加入酶標(biāo)試劑(空白孔除外)。

　　?溫育?：用封板膜封板后置37℃溫育一定時(shí)間。

　　?配液?：將濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋后備用。

　　?洗滌?：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置后棄去，重復(fù)多次，拍干。

　　?顯色?：每孔加入顯色劑A和B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色。

　　?終止?：每孔加終止液，終止反應(yīng)。

　　?測(cè)定?：以空白孔調(diào)零，在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。

　　六、注意事項(xiàng)

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡一段時(shí)間后方可使用。

　　濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

　　各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　底物應(yīng)避光保存。

　　嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

　　七、性能與保存

　　?性能?：樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值通常高于0.95，批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15%。

　　?保存?：試劑盒應(yīng)保存在2-8℃，有效期通常為6個(gè)月。

　　請(qǐng)注意，以上信息為通用標(biāo)準(zhǔn)概述，具體實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵循所使用試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。