大鼠苗條素受體(LROb-R)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-2971 大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒簡介

　　大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒是一種基于雙抗體夾心法原理設計的酶聯免疫吸附檢測試劑盒，用于定量測定大鼠血清、血漿、細胞培養上清液及相關液體樣本中苗條素受體的含量?。該試劑盒通過特異性抗體捕獲目標抗原，再與酶標記抗體結合形成復合物，最終通過顯色反應進行定量分析?。

　　二、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法：

　　將純化的大鼠苗條素受體抗體包被于微孔板，形成固相抗體

　　加入樣本或標準品，其中的LR/Ob-R與固相抗體結合

　　加入HRP標記的LR/Ob-R抗體，形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物

　　洗滌后加入TMB底物顯色，在HRP酶催化下產生藍色產物，酸作用下轉為黃色

　　顏色的深淺與樣品中LR/Ob-R濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值?

　　三、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含以下組分(48T/96T兩種規格)：

　　微孔酶標板?：8孔×6條(48T)或8孔×12條(96T)，預包被抗體?

　　標準品?：濃度通常為2700ng/L或72ng/L(不同批次可能有差異)，0.3mL-0.5mL×6管?

　　檢測抗體-HRP?：5mL(48T)/10mL(96T)?

　　樣本稀釋液?：3mL(48T)/6mL(96T)?

　　20×洗滌緩沖液?：15mL(48T)/25mL(96T)，使用前需稀釋?

　　顯色劑?：A液和B液各3mL(48T)/6mL(96T)?

　　終止液?：3mL(48T)/6mL(96T)?

　　封板膜?：2張?

　　說明書?：1份?

　　四、樣本采集與處理

　　1. 樣本類型

　　適用于血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、尿液、胸腹水、腦脊液等?

　　2. 樣本處理方法

　　血清?：全血室溫放置2小時或4℃過夜后，1000g離心20分鐘取上清?

　　血漿?：EDTA或肝素抗凝，采集后30分鐘內2-8℃ 1000g離心20分鐘?

　　細胞培養上清?：1000g離心20分鐘取上清?

　　組織勻漿?：用PBS(pH7.2-7.4)制備10%勻漿，10000g離心5分鐘取上清?

　　3. 樣本保存

　　短期(48小時內)可2-8℃保存

　　長期應分裝后-20℃保存，避免反復凍融?

　　溶血樣本不宜檢測?

　　五、實驗步驟

　　試劑準備?：

　　從冰箱取出試劑盒，室溫平衡30分鐘?

　　配制洗滌液：將20mL濃洗滌液加蒸餾水稀釋至600mL(30倍)?

　　標準品稀釋：按說明書梯度稀釋(通常設5-7個濃度點)?

　　加樣?：

　　設空白孔(僅加樣本稀釋液)、標準品孔和樣本孔

　　分別加入100μL標準品或處理好的樣本?

　　孵育?：

　　37℃孵育90分鐘?

　　棄去液體，拍干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復5次?

　　加酶標試劑?：

　　每孔加入100μL HRP標記抗體(空白孔加稀釋液)

　　37℃孵育60分鐘?

　　同上洗滌5次?

　　顯色?：

　　每孔加入50μL顯色劑A，再加50μL顯色劑B

　　37℃避光顯色15-30分鐘?

　　終止與測定?：

　　每孔加入50μL終止液

　　15分鐘內用酶標儀在450nm波長測定OD值?

　　六、結果計算

　　以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線?

　　根據樣本OD值，從標準曲線查出相應濃度?

　　若樣本稀釋過，需乘以稀釋倍數?

　　也可用回歸方程計算：將OD值代入方程Y=aX+b，求出X值?

　　七、注意事項

　　試劑保存?：

　　未開封試劑盒2-8℃保存，有效期內使用?

　　開封后未用完板條應立即密封，加干燥劑保存?

　　操作規范?：

　　不同批次試劑不可混用?

　　使用一次性吸頭避免交叉污染?

　　避免顯色劑接觸金屬器械?

　　洗滌要充分，拍干時避免吸水紙直接接觸孔內?

　　質量控制?：

　　建議標準品和樣本做雙復孔?

　　顯色過淺可適當延長溫育時間?

　　若OD值超出標準曲線范圍，應調整樣本稀釋比例重新測定?

　　儀器要求?：

　　使用精確的移液器(0.5-10μL, 20-200μL, 200-1000μL)?

　　酶標儀需提前預熱并校準?

　　八、技術參數

　　檢測范圍?：通常為15-1000ng/L(不同品牌可能有差異)?

　　靈敏度?：通常5[6

　　精密度?：

　　板內變異系數<10%

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據，具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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