犬白細(xì)胞分化抗原6(CD6)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)犬CD6抗原：

　　包被抗體：微孔板預(yù)包抗CD6單克隆抗體，特異性捕獲樣本中的CD6抗原。

　　生物素標(biāo)記抗體：加入生物素標(biāo)記的多克隆抗體，與已結(jié)合的CD6形成“夾心"結(jié)構(gòu)。

　　酶聯(lián)反應(yīng)：通過HRP標(biāo)記的鏈霉親和素與生物素結(jié)合，催化底物TMB顯色，吸光度(OD值)與CD6濃度成正比。

　　二、試劑與材料

　　試劑組分：

　　預(yù)包被微孔板(96T/48T)

　　CD6標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度)

　　生物素化抗體、HRP-鏈霉親和素

　　TMB底物液、終止液、洗滌液(20×濃縮) 。

　　儀器：酶標(biāo)儀(450 nm)、微量移液器、恒溫箱(37℃)、離心機(jī)。

　　三、操作步驟

　　樣本處理：

　　血清/血漿：室溫凝固后離心(2000×g，15分鐘)，取上清。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清：直接離心去除顆粒物。

　　組織勻漿：加PBS勻漿后離心取上清。

　　檢測(cè)流程：

　　加樣：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育1小時(shí)。

　　洗滌：棄液后，用洗滌液洗板3次，拍干。

　　加酶標(biāo)抗體：加入100μL生物素化抗體，37℃孵育30分鐘。

　　顯色：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘，終止液終止反應(yīng)。

　　結(jié)果計(jì)算：

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本濃度通過曲線方程計(jì)算。

　　四、注意事項(xiàng)

　　試劑保存：未開封試劑盒2-8℃保存，避免反復(fù)凍融;濃縮洗滌液需37℃溶解鹽結(jié)晶.

　　干擾因素：避免樣本溶血、高濃度脂血或反復(fù)凍融.

　　質(zhì)量控制：每個(gè)樣本設(shè)復(fù)孔，標(biāo)準(zhǔn)品CV值應(yīng)<10%.

　　五、技術(shù)參數(shù)

　　靈敏度：檢測(cè)限≤1.0 pg/mL。

　　線性范圍：1.56–100 pg/mL .

　　注：以上資料僅供參考，具體其他信息請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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