人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-0367人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法：

　　包被階段：微孔板預包被抗人sTNFαR單克隆抗體(固相抗體)。

　　結(jié)合階段：樣本中sTNFαR抗原與固相抗體結(jié)合，后加入生物素標記的二抗形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物。

　　顯色階段：TMB底物經(jīng)HRP催化顯色，**終止液(2mol/L H?SO?)**終止反應并轉(zhuǎn)為黃色，450nm測OD值。

　　二、試劑盒組成

　　組分  規(guī)格  儲存條件

　　酶標包 被板96孔/48孔4℃避光

　　標準品 0.5ml×1瓶-20℃分裝保存

　　終止液 6ml×1瓶2-8℃

　　生物素標記抗體 6ml×1瓶4℃避光

　　顯色劑(A/B液) 各6ml4℃避光

　　三、樣本處理規(guī)范

　　血清：全血室溫凝固30min，2000×g離心20min，避免溶血。

　　血漿：肝素抗凝，1000×g離心30min，去除顆粒物。

　　細胞裂解液：PBS洗滌后裂解，14000×g離心10min取上清。

　　四、操作步驟

　　加樣：標準品/樣本50μL + 生物素抗體100μL，37℃孵育60min。

　　洗滌：洗板5次，拍干(避免殘留)^^2^^。

　　顯色：TMB避光孵育15min，終止液50μL/孔，立即測OD值。

　　五、數(shù)據(jù)分析

　　標準曲線：四參數(shù)擬合，樣本OD值代入曲線計算濃度。

　　質(zhì)控要求：空白孔OD值應<0.1，板內(nèi)/板間CV<10%。

　　六、注意事項

　　終止液安全：含強酸，操作時佩戴防護裝備。

　　時效性：加入終止液后需30分鐘內(nèi)檢測，防止吸光度衰減。

　　干擾因素：避免NaN3、溶血或高脂樣本。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，如果其他具體信息請咨詢技術(shù)老師或品牌供應商。

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