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        小鼠α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)
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          小鼠α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)

          本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)小鼠α-GST水平。預(yù)包被抗體的微孔板捕獲樣本中的α-GST,加入生物素標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物,再通過(guò)SABC-辣根過(guò)氧化物酶系統(tǒng)顯色。顯色強(qiáng)度與α-GST濃度成正比,450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。

          二、試劑盒組成

          組分48T規(guī)格96T規(guī)格保存條件

          預(yù)包被酶標(biāo)板8×6條8×12條2-8℃密封

          標(biāo)準(zhǔn)品6管(0-24 U/L)6管(0-24 U/L)2-8℃

          生物素化檢測(cè)抗體60μL(100×)120μL(100×)-20℃

          TMB顯色液各3mL(A/B液)各6mL(A/B液)避光

          終止液6mL12mL室溫

          20×濃縮洗滌液30mL60mL室溫

          三、實(shí)驗(yàn)步驟

          樣本處理

          血清/血漿:采集后離心(3000rpm, 10min),避免溶血,2-8℃保存48小時(shí)或-80℃長(zhǎng)期保存。

          組織勻漿:按0.1g組織加1mL PBS比例冰浴勻漿,離心取上清,稀釋50倍后檢測(cè)。

          檢測(cè)流程

          加樣:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本,37℃孵育90分鐘。

          洗滌:棄液后拍干,每孔加洗滌液200μL,重復(fù)3次。

          顯色:加入100μL酶標(biāo)抗體,37℃孵育30分鐘,加TMB底物避光反應(yīng)15分鐘。

          終止:每孔加50μL終止液,30分鐘內(nèi)測(cè)定OD值。

          四、數(shù)據(jù)分析

          標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(U/L)為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)擬合四參數(shù)曲線。

          樣本計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算α-GST濃度,組織樣本需乘以稀釋倍數(shù)(如50倍)。

          五、注意事項(xiàng)

          樣本要求:避免反復(fù)凍融,高脂樣本需離心去除懸浮物。

          溫度控制:反應(yīng)全程保持37℃,顯色避光防淬滅。

          安全操作:TMB底物具腐蝕性,需佩戴手套操作。

          數(shù)據(jù)驗(yàn)證:建議設(shè)置復(fù)孔,OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)需稀釋重測(cè)。

          注意:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。

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