微生物艱難梭菌毒素A(TCD-A)ELISA試劑盒技術使用說明書

　　BS-5181 微生物艱難梭菌毒素A(TCD-A)ELISA試劑盒

　　實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測樣本中TCD-A濃度，通過預包被的抗TCD-A單抗捕獲抗原，結合生物素標記的二抗及HRP酶偶聯物，經TMB底物顯色后，在450nm波長下測定吸光度，濃度與OD值呈正相關。

　　操作流程

　　樣本處理

　　糞便樣本：取0.2g糞便加入0.5ml稀釋液，混勻后離心(2000rpm，10分鐘)，取上清檢測。

　　細胞培養上清：直接檢測或稀釋后使用，避免反復凍融。

　　試劑準備

　　洗滌液：20倍濃縮液用蒸餾水稀釋至1倍。

　　標準品：4000pg/ml母液按梯度稀釋(2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/ml) 。

　　檢測步驟

　　加樣：標準品/樣本(50μl/孔)與檢測抗體溫育1小時。

　　顯色：TMB底物避光反應15分鐘，2M硫酸終止。

　　讀數：酶標儀450nm波長測定，標準曲線計算濃度。

　　關鍵注意事項

　　樣本要求：糞便樣本需新鮮采集，避免溶血或污染;細胞上清需離心去除顆粒物。

　　試劑穩定性：未拆板條2-8℃保存，標準品溶解后需分裝凍存。

　　質量控制：建議設置復孔，回收率應達80-120%。

　　安全防護：處理糞便樣本需按生物安全規范操作。

　　數據分析

　　標準曲線需滿足R2≥0.99，典型靈敏度為7pg/ml，檢測范圍31.25-2000pg/ml

　　注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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